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ELISA试剂盒优化加样需要注意那些地方？
发布时间： 2020-06-16 点击次数： 949次ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA 、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒加样的优化：在这一进程中，一般情况下有三次加样，它们分别是加标本，加酶物，加底物。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，防止气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上剧烈振动。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝集、缩短后即可获得。也可在板孔中参与稀释液，再在其参与血清标本，然后在微型颤动器上颤动1分钟以确保混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，跨过一星期测定的需低温冰存。1、血清：用无菌管搜集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如出现堆积，应再次离心。2、尿液：用无菌管搜集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。3、血浆：应根据标本的要求挑选EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应该再次离心。4、胸腹水：用无菌管搜集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。5、脑脊液：用无菌管搜集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。6、唾液：用无菌管搜集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管搜集。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。8、牛奶：用无菌管搜集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），细心搜集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。ELISA试剂盒检测过程中的注意事项：1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但*有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。4、实验时，要使底物避光保存。5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。12、底物是光敏感的，要在临用前现配。13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。15、待检样品要澄清，否则会影响结果。16、温浴时间应遵守试剂盒规定。17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。（内容仅供参考，如有问题或遇到问题可咨询我们会竭诚为您服务）
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