CGRP试剂盒操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL,余孔分别加标准品或待测样品 100μL,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜,37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL(在使用前 15 分钟内配制),酶标板加上覆膜,37℃温育 1 小时。
3. 弃去孔内液体,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分钟,大约 350μL/每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4. 每孔加酶结合物工作液(临用前 15 分钟内配制)100μL,加上覆膜,37℃温育 30 分钟。
5. 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL,酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右(根据实际显se情况酌情缩短或延长,但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止)。
7. 每孔加终止液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度(OD 值)。应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。
9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。
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