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    抗体常见问题

    发布时间: 2023-06-07  点击次数: 634次

    问题

    原因

    解决方案

    边缘效应

    组织边缘贴附不牢,边缘组织松脱漂浮于液体中

    APES/多聚赖氨酸处理玻片;组织切片尽量薄;尽量避免选用坏死较多的组织


    试剂未充分覆盖组织

    滴加试剂时让试剂完整覆盖组织

    非特异性染色体

    抗体质量问题

    使用质量有保证的抗体


    抗体孵育时间长

    减少孵育时间


    抗体浓度过高

    降低抗体浓度


    一抗为多抗

    使用单克隆抗体


    内源性过氧化物酶及生物素

    延长灭活时间


    封闭不足

    延长封闭时间


    DAB孵育时间过久或浓度过高

    按说明书配置试剂,镜下控制反应时间


    抗体孵育后洗涤不充分

    每次孵育之后洗3*5次


    滴加试剂时干片

    及时滴加试剂


    切片在缓冲液中浸泡过久

    抗原修复之后及时封闭加一抗,不能过夜

    阴性结果

    抗体浓度及质量

    选择有质量保证的抗体,先做预实验摸索抗体使用浓度


    抗原修复不全

    摸索合适的抗原修复方式及修复时间


    抗原丰度

    正常阴性


    封闭时间过长

    减少封闭时间


    DAB孵育时间短

    镜下控制显色时间


    细胞通透不全,抗体未能进入细胞反应

    选择合适的通透剂及其反应时间


    一抗二抗不匹配

    选择正确来源的二抗

    脱片

    玻片未处理好

    玻片清洗干净后用APES或多聚赖氨酸处理


    切片厚薄不均匀

    更换刀片;调整好切片机状态


    烤片时间或温度不够

    60摄食度2小时


    组织自身问题

    肿瘤坏死组织及骨组织本身易脱片


    抗原修复时温度迅速变化

    抗原修复后让其自然冷却


    操作时用力过猛

    有脱片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水纸吸干残余液体

    染色弱

    抗体浓度低,孵育时间短

    提高抗体浓度,延长反应时间


    试剂使用超过有效期

    试剂定时更新


    滴加试剂时残余缓冲液过多使试剂稀释

    滴加试剂前尽量减少残余液体


    封闭过度

    减少封闭时间

    着色不均匀

    切片厚度不一致

    更换刀片;调整好切片机状态


    试剂配制未混匀使局部浓度不一致

    试剂充分混匀后滴加


    试剂未完整覆盖组织

    滴加试剂时让试剂完整覆盖组织


    脱蜡不完整

    更换脱蜡剂或延长脱蜡时间


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