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很多老师第一次接触ELISA实验时,对于ELISA的标准曲线如何更好的建立可能会有疑惑。下面我们为大家提供2种建立标曲的方法。
一、使用:CurveExpert 汉化版 V1.4 软件作图。
1、下载好软件并解压。
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2、点击图标进入软件后,将标曲OD值、标曲浓度复制粘贴进软件中。
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3、选择合适的方程建立标曲。可选择 二项式、直线线性、四参数等方式拟合标曲。
除非标曲做的特别好,误差小、R值高,可以选择直线线性拟合;一般都建议使用二项式拟合。
下面我们使用二项式拟合。
4、点击“ 二项式拟合"键,得到下图,可以看到中间的曲线及右侧标曲的R值=0.999
再点击左侧的“Info"键,得到标曲的公式以及公式的系数。
5、公式:Y=a+bX+cX^2
X为已知样本的OD值,a、b、c为标曲公式已知的系数,则Y为待求的样本浓度。
将上图的公式带入excel表格中,将样本OD值带入公式。
6、点击“回车"键,得到公式换算的样本浓度。
再将鼠标光标移到方框右下角,双击,将剩余的样本浓度自动填充结果,结束计算。
二、使用EXCEL表格“散点图"作图。
首先选中标曲数据(1);
点击“插入"(2);
建立“散点图"(3);
选择图右上角的“图表元素"(4);
选择“趋势线"(5);
下一级的“更多选项"(6);
然后点击画面右侧的“多项式"或者“线性",这里我们选择“多项式"建立标曲(7);
再点击下方的“显示公式"、“显示R平方值"(8);
再建立公式,将样本OD值,带入得到的公式中(9),
得到换算的样本浓度。