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    探讨血清进行热灭活的原因

    发布时间: 2023-02-16  点击次数: 591次
       血清一般具有促进细胞生长代谢、提供各种生长因子、保护培养中的细胞等作用。血清提供基础营养物质,如氨基酸、维生素等,可以促进细胞生长代谢。提供各种生长因子以及激素,如血小板生长因子、雌二醇等。提供伸展因子及促接触因子,就可以保护细胞贴壁,减少机械损伤。提供结合蛋白,可携带低分子物质,如铁、激素等,维持细胞代谢。
      血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题,价格不菲的血清中含有诸如生长因子,维生素,氨基酸等珍贵物质,而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此,在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行,多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子,氨基酸等成分带来的负面影响,在我们的技术专线中常被提到的就是否该对血清进行热灭活,下面我们就对胎牛血清的热灭活进行一些探讨和解释。
      根据调查,至少70%的研究者对血清的灭活仅仅是因为遵照常规操作,或者说认为是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等.其中*chang用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。
      热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。有科研人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1,C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,我们也在多个不同批次的胎牛血清中获得了相似的结果。即使是在未稀释的血清中,也未发现有明显的溶血现象。另外,多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。
      在对补体灭活以外,热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作用。多年以前,450纳米孔径的滤膜被用于加工血清时,血清中支原体的污染时有发生。针对这个问题,HyClone使用100纳米三层滤膜连续滤过技术,自从采用这项技术以及后来的40纳米滤过技术之后,我们的血清产品中没有再发现有支原体的污染,也是使得热灭活成为不必要的另外一个原因。
      Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化,有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用,在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4细胞对细胞粘附实验中,热灭活对胎牛血清的影响小于对小牛血清的影响。
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